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MaxCyte流式电穿孔转染系统

发布时间:2017/12/13 点击量:
MaxCyte公司为您提供流式电穿孔转染系统®两套高通量电穿孔转染系统,能够以静态转染或者具有独家专利技术的流式电穿孔技术帮您实现高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求,转染通量高达5E5 to 2E11个细胞,广泛应用于DNA, RNA, 小分子等转染材料在原代细胞、细胞系、干细胞、昆虫细胞等不同细胞的转染实验中,系统操作简单、实验结果重复性高,并且符合现行药品生产管理规范(cGMP)标准,通过了国际标准化组织(ISO)认证,欧洲安全(CE)认证。

1. 以 5X105个/ml 的浓度在 75 cm2 培养瓶中接种 L8057-Y10 细胞(F12/FB 培养基)流式电穿孔转染系统(含谷氨酰胺(2 mmol/L ),青霉素(50 U/ml ) 及链霉素(5 μg/ml ) 的 Ham’s F12 , 添加 10% FBS (热灭活;GIBCO #16140-014)),并于 37°C,5% CO2 孵箱培养细胞。

2. 在对数生长后期,收集细胞,4°C ,380 g 离心 5 min。

3. 用 10ml D-PBSA 洗涤细胞沉淀,4°C,380 g 离心 5 min。

4. 用 5 ml 电穿孔缓冲液洗涤细胞沉淀,用血细胞计数仪计数细胞。

5. 4°C,380 g 再次离心 5 min,收集细胞。

Maxcyte系统基础技术原理是电穿孔,传统的电转细胞死亡率高,流式电穿孔转染系统每种细胞的电转的条件都需要优化,而Maxcyte公司利用其专利技术的流式电穿孔技术,细胞流入一个电击腔室中进行电转染,系统已优化电场强度、电脉冲时间和次数等多个参数,系统预存多个细胞系的转染方法,来满足高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求,是完整解决方方案的技术平台。

1. 将轰击后的细胞移至盛有 10 ml F12/FB 的离心管中,另取少许培养基冲洗电穿孔杯,移回到离心管,离心,收集细胞。

2. 将细胞于 20 m l F12/FB 中再次悬浮,种到 75 cm2 培养瓶中,于37°C ,5 %CO2 培养箱中孵育,令新霉素抗性基因表达。

3. 24~48 h 后,离心收集细胞,然后用 20 ml 选择性培养基中再次悬浮细胞。

4. 随后,需每 2~4 天换液(选择性培养基),以清除死亡细胞的碎片,流式电穿孔转染系统并且使抗性细胞生长,筛选过程至少需要两周。

目前工业上用于抗体表达的细胞株如CHO、BHK和Vero等都是稳定表达的,稳定表达虽然产量高,但耗时太长,不适合早期研发高通量小规模表达多种抗体。研发抗体类药物的科研机构和生物制药公司急需小规模高通量的表达抗体蛋白的技术平台,而瞬时表达系统可在短时间内获得足够的研究用的抗体样本,流式电穿孔转染系统可对抗体进行有效性和安全性评价,在抗体类生物药物研发的早期受到了更大的重视。Maxcyte技术平台很好的满足了客户对快速获取一定量的抗体蛋白的需求。

1.Neon系统中没有带传统的电转杯,这就是它的独特之处。.
2.Neon系统用一个特殊的移液器吸头取代了传统的电转杯。
3.移液器吸头内使用24K镀金电极,可形成更为均匀的电场,同时最大限度地减少温度升高和pH值变化幅度,
4.在确保细胞高效转染的同时,也更为温和,保证细胞存活率更高。

Maxcyte STX流式高通量大规模的转染平台,可满足高转染效率、高细胞成活率的转染工作需求,单次转染通量高达2E10个细胞,可将DNA, RNA, 小分子等转染材料转染到原代细胞、细胞系、干细胞、昆虫细胞等不同细胞体系中,系统操作简单,实验结果重复性高。在抗体如单克隆抗体和双特异性抗体、重组蛋白和疫苗的表达生产上可实现规模化;流式电穿孔转染系统同时可用于细胞治疗上进步如将肿瘤抗原导入到树突状细胞中、siRNA导入到肿瘤中和mRNA导入到工程化的T细胞或B细胞中。      




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